造血干细胞移植（HSCT）是治愈某些恶性血液病最有效的方法，也是治疗某些免疫性疾病、遗传性疾病、代谢性疾病、某些实体瘤的根本途径。对于有剂量要求的造血干细胞移植方案而言，精确的造血干细胞计数十分重要。ISHAGE法是目前国际公认的检测造血干细胞最精确的方法，由血液病治疗及移植国际联合会的干细胞绝对计数小组制订，应用ISHAGE方案可分析骨髓、外周血、采集物、脐带血等类型样本，结合迈瑞BriCyte E6流式细胞仪体积法单平台绝对计数，可同时输出造血干细胞百分比和绝对计数结果，方便、准确、低成本。
【检测原理】
造血干细胞的表型特点为表达CD34、弱表达CD45，散射光通道表达强度与淋巴细胞表达一致，使用流式细胞仪通过一系列逻辑设门，可以成功地将这群细胞检测出来。
【试剂】
CD45-FITC、CD34-PE、溶血剂
【样本制备】
1. 在流式管中加入100ul样本；
2. 按照试剂说明书的要求加入一定量的CD45-FITC和CD34-PE试剂，混匀，避光孵育15分钟；
3. 向流式管中加入1×溶血剂900ul，避光孵育15分钟。
【数据采集和分析】
采用BriCyte E6流式细胞仪配套MRFlow软件进行数据采集。
1. 勾选“绝对计数”选项，输入样本稀释比例；
2. 建CD45/SSC散点图，围绕CD45阳性和弱阳性细胞设门P1；
3. 建CD34/SSC散点图，显示P1门细胞，围绕CD34阳性SSC低细胞群设门P2；
4. 建CD45/SSC散点图，显示P2门细胞，围绕CD45弱阳性细胞设门P3，除外CD45强的细胞；
5. 建立FSC/SSC散点图，显示P3门细胞，围绕细胞群设门P4；
6. 在CD45/SSC散点图中围绕CD45强阳性淋巴细胞设门P5；
7. 建FSC/SSC散点图，显示P5门细胞，围绕淋巴细胞设门P6，除外比淋巴细胞FSC小的细胞，根据P6门调整P4门，使P4门与P6门完全一致（可复制P6门，覆盖P4门）；
8. 停止条件可设置为P1门粒子数100000，同时满足CD34+（P4）细胞数大于100；
9. 造血干细胞百分比即为P4门细胞占P1门细胞（所有有核细胞）的百分比，造血干细胞计数可直接读取。
【图形及结果】
图:ISHAGE设门分析法检测造血干细胞
（P4门为造血干细胞，占有核细胞百分比为0.64%）
（责任编辑：lgh）
